神马品牌网现在还有完颜:谁知道琼脂糖亲和层析的具体步骤？
来源：百度文库 编辑：神马品牌网 时间：2024/04/28 01:47:00
最好有比较详细的实验步骤。谢谢
亲和层析法
亲和层析是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离目的的一类特殊层析技术。
具有专一亲和力的生物分子对主要有：抗原与抗体、DNA与互补DNA或RNA、酶与它的底物或竞争性抑制剂、激素（或药物）与它们的受体、维生素和它的特异结合蛋白、糖蛋白与它相应的植物凝集素等。可亲和的一对分子中的一方以共价键形式与不溶性载体相连作为固定相吸附剂，当含有混合组份的样品通过此固定相时，只有和固定相分子有特异亲和力的物质，才能被固定相吸附结合，其它没有亲和力的无关组份就随流动相流出，然后改变流动组成份，将结合的亲和物洗脱下来。亲和层析中所用的载体称为基质，与基质共价连接的化合物称配基。
亲和层析纯化过程简单、迅速，且分离效率高。对分离含量极少又不稳定的活性物质尤为有效。但本法必须针对某一分离对象，制备专一的配基和寻求层析的稳定条件，因此亲和层析的应用范围受到了一定的限制。
亲和层析可用于纯化生物大分子：稀溶液的浓缩；不稳定蛋白质的贮藏；从纯化的分子中除去残余的污染物；用免疫吸附剂吸附纯化对此尚无互补配体的生物大分子；分离核酸是亲和层析应用的一个重要方面。
琼脂糖是从琼脂中提取出来的，是由半乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多糖。含硫酸根比琼脂少，因而分离效果明显提高。
这是一种利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别能力而建立的一种分离纯化方式。
1、把待纯化的某一蛋白质的特异配体共价连接到琼脂糖凝胶载体表面的功能基上。
2、在多糖载体和配体之间加一个连接臂，消除载体表面位阻。
3、蛋白质混合物加到层析柱后，目标蛋白质与配体结合，杂蛋白不能结合可被洗涤除去。
4、结合的蛋白可用含游离的相应配体溶液从柱上洗脱下来