中国化工十大毒药:什么植物中含有紫杉醇即如何提取

来源:百度文库 编辑:神马品牌网 时间:2024/05/06 13:07:11
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红豆杉树的树皮里含有微量的紫杉醇。
从紫杉植物中提取紫杉醇的简化方法
红豆杉Taxus又名紫杉,也称赤柏松,生于海拔1000~1200m处的山地,是世界上公认的濒临灭绝天然珍稀植物,从其根、皮、茎、叶中提取的紫杉醇taxol是目前世界上最有效的抗癌药物之一。全球每年大约需要1500~2500kg紫杉醇,而1 kg树皮仅能提取50~100mg。 10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ又称10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ,10-deacetylbaccatinⅢ,10-DABⅢ为有抑制肿瘤作用的紫杉烷二萜类化合物。Bissery等报道,可利用10-DABⅢ合成具有比紫杉醇更高抗癌活性的多烯他赛docetaxel。紫杉醇主要存在于树杆和树皮中,10-DABⅢ主要存在于树叶中,其含量大大高于紫杉醇的含量。 红豆杉是国家珍稀保护植物,生长缓慢,如果直接从红豆杉树皮中提取紫杉醇,不仅资源有限,而且不利于资源保护。以10-DABⅢ为原料采用酶催化半合成工艺方法来制备紫杉醇,可大大简化合成过程,使紫杉醇骨架修饰所需步骤更少,操作更简单,提高了紫杉醇合成的选择性和生产率,进而为在更大规模上进行紫杉醇生产提供了技术支持,最终使紫杉醇的化学合成半合成的产业化有了实现的可能。
目前文献报道从各种紫杉植物中提取紫杉醇的方法,均需经过繁冗的分离过程。本实验采用了一种适合于以各种紫杉植物树叶或树枝做原料,通过极性梯度溶剂萃取的方法逐步脱除大量不相干杂质,得到合成紫杉醇的前体10-DABⅢ的方法,然后通过反相层析柱加成,即可获得抗癌活性成分紫杉醇; 材料与方法 1 材料与仪器
南方红豆杉Taxus mairei枝叶取自浙江宁海红豆杉种植基地,8年树龄。10-DABⅢ对照品为Sigma公司产品,纯度98%;所用甲醇;乙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、氯仿、正己烷、石油醚、乙腈等均为分析纯试剂。JJ一1精密增力电动搅拌仪,江苏金坛市江南仪器厂;SENCO R一201旋转蒸发仪,上海申顺生物科技有限公司;玻璃硅胶柱为2cm×40cm,杭州常盛科教器具厂;UV一2802PC/PCS型分光光度计,UNICO上海仪器有限公司;Sigma一3K18低温离心机4℃,转速18000rmin;LabAlliance高效液相色谱仪美国SSI公司。
2 实验方法
取南方红豆杉枝叶研磨成细粉,于燥保存。称取100g红豆杉细粉,45℃烘干,石油醚预处理,5L甲醇冷浸,辅以搅拌,超声40min,反复2次。浸渍液过滤,减压浓缩至100mL。加入75 mL正己烷萃取分液,重复操作2~3次。弃去正己烷层,萃余液旋干溶剂,制成浸膏。加入氯仿与水的混合液1:1反复提取。氯仿层减压浓缩至10~15mL上柱,用硅胶正相色谱柱分离。分段收集洗脱液,紫外监测,收集有效段合并浓缩,在甲醇/水中重结晶。 3 分析测试方法
采用反相高效液相色谱RP―HPLC方法检测。分析柱为Kromasil C18柱250mm×4.6 mm,5μm,流动相为乙腈-水30:70,流速为2.0 mLmin,每次进样体积为10μl,进样间隙用纯乙腈对柱子进行梯度冲洗。紫杉醇最大吸收波长为227nm,检测器测定波长为232nm,温度30℃,相关数据计算均采用峰面积归一化法。
结 果 1 预处理
由于红豆杉枝叶中含有大量蜡质、植物色素诸如叶绿素等低极性杂质,故在提取前应首先加入低极性溶剂如正己烷、石油醚浸泡脱脂,以除去大量存在的此类非极性杂质,简化后续操作。该法可除去红豆杉枝叶中多达72%的极性比10-DABⅢ小且可溶于正己烷的杂质。
2 有机溶剂粗提
目前用于紫杉烷类物质提取的最普通的初级萃取剂是乙醇甲醇和水,Xu等采用的是体积比95:5的甲醇和二氯甲烷的混合物,萃取时间为35~60min;而Hoke等和Powell等都选择的是纯甲醇,所需萃取时间为16~48h。将南方红豆杉枝叶的细粉在45℃烘干,甲醇浸渍,搅拌过夜。在搅拌的不同时间内其提取出的10-DABⅢ的含量。可以看出,有机溶剂粗提时的浸渍搅拌时间应以12h左右为佳。
3 初级萃取

将甲醇萃取液减压旋蒸至干,得浸膏。用10倍体积以甲醇浸膏的量为基准的纯净水分几次全部溶解,因目标产物10-DABⅢ不溶于水,故而形成悬浮液。用石油醚或正己烷反复萃取,因目标产物不溶于非极性溶剂正己烷中,经此可基本去除极性比10-DABⅢ小的杂质。
在大多数情况下,还须对甲醇粗提物进行萃取操作。一般是在初级萃取物中加入二氯甲烷和水的混合物,即液液萃取,该方法可有效除去萃取液中50%质量比的非紫杉烷类物质。但实验发现要严格掌握好甲醇、二氯甲烷、水三者的比例,否则会出现提取不彻底,在两相中均含有目标产物,且还会有乳化现象发生。
本实验中是采用加入氯仿/水的混合溶液 1:1将浸膏完全溶解然后进行液液萃取。操作中 应按照每次向水相中加入4~5倍体积的氯仿来进行,并轻轻振荡分页漏斗,以避免出现严重的乳化现象。因实验中发现二氯甲烷在用碱液和水洗时不可避免严重乳化,造成目标产物损失难以回收,而氯仿因与目标产物极性相匹,对10-DABⅢ的溶解性更高,与水相分层界面明显,可在更大程度上实现目标产物10-DABⅢ与极性水溶性杂质的分离。
4 重结晶
将已检测确认的洗脱液收集,浓缩,制成浸膏。在少量乙腈中重结晶。滤出的残渣再用甲醇/水洗涤2~3次,即可得到10-DABⅢ的晶体,烘干,称重,共计79.16mg。10-DABⅢ纯度达到91%,该步收率可达72%。
由于单一萜类化合物在植物中含量低,需要较多分离步骤才能纯化出来。因此,采用有效的提取方法和缩短分离步骤提高每步的收率是成功的关键。本研究利用萃取和层析方法相结合,使繁琐的分离步骤大为缩减,工艺路线为:红豆杉枝叶采集、粉碎,45℃烘于,石油醚预处理后用甲醇浸渍,同时辅以搅拌、超声。然后过滤,滤液旋蒸以缩小体积,浓缩液用正己烷反复萃取之后再蒸干制成浸膏。浸膏用氯仿/水反复抽提,萃取分液,得到氯仿的抽提物再上柱细分。收集含有10-DABⅢ的洗脱段,旋蒸去除溶剂,适量乙腈溶解,进行重结晶,再用乙醇/水反复洗涤晶体,得到10-DABⅢ的纯品。
本工艺中采用的南方红豆杉树叶中10-DABⅢ的含量经测定为在1‰,得到的紫杉醇合成的前体物10-DABⅢ纯度大于90%,总收率达到7.9%,与文献相比较说明实验采用的原料及分离和纯化工艺都是可行的。但由于本实验目前还处于实验室研究阶段,在重结晶操作环节中尚存在一些问题,如怎样去除残留溶剂对重结晶的影响及晶形的改善等还都需要进一步的研究。

一种珍贵树种.它以前不珍贵,但是现在珍贵了,就是因为太多人要提取紫杉醇!!

为了大自然,我觉得你还是不要知道的好.
另外,我觉得,你要发展你的家乡,可以,但是,不要破坏我们的大自然!

家乡是农村,我建议你学好知识,回到家乡以后,用知识改变农村的面貌,改变农民的命运!

是红豆杉,但是含量非常低,提取1克需要3-6株60年生的大树的树皮,我学的是林学,上面的的donaldtan2说的很对,为了这种珍惜的濒危植物,请不要再向它伸手.因为它对癌症有很好的作用,另外现在的科研人员已经在着手研究人工合成品,以期来代替从自然界中提取,将来肯定可以研发成功,另外即使你想种植的话,也需要自然气候条件适合才好.
要改变农村还有很多方法的!请继续努力吧!

红豆杉树的树皮里含有微量的紫杉醇。

现代技术是把紫杉醇合成基因转入真菌(霉菌啊蘑菇啊什么的),通过真菌表达来富集。技术复杂同时也酸得上商业机密了。

用某种有机溶剂